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簡要描述：本試劑盒中采用du特配方，能夠快速高效的裂解各種常見樣本，無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒RNA，適用于TaqMan等熒光標(biāo)記探針的高特異性檢測(cè)。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒RNA的提取。5×one step qRT- PCR Mix 試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng)，可消除擴(kuò)增污染對(duì)qPCR的影響。
產(chǎn)品型號(hào)：廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時(shí)間：2023-04-27訪 問 量：1192快速病毒RNA免核酸提取熒光PCR檢測(cè)試劑盒
試劑盒簡介：本試劑盒中采用du特配方，能夠快速高效的裂解各種常見樣本，無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒RNA，適用于TaqMan等熒光標(biāo)記探針的高特異性檢測(cè)。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒RNA的提取。5×one step qRT- PCR Mix 試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng)，可消除擴(kuò)增污染對(duì)qPCR的影響。
組分 | M-DNA01 |
RNA-Lysis | 1.5 mL （50T） |
5×one step qRT- PCR Mix | 200 μL ( 50T ) |
樣品稀釋液 | 20 ml ( 50T ) |
保存期：-20oC 保存，保存期一年。
注意：使用前將RNA-Lysis室溫充分混勻。
一、 樣品的處理方法
1.少量樣本處理方法
（1）吸取15μL樣本放入1.5ml離心管中。
（2）加入25 μL RNA Lysis。
（3）充分混勻,室溫靜置5分鐘，加入350µL樣品稀釋液混勻。
（4）10,000rpm離心1分鐘，取1-2μL作為PCR反應(yīng)模板。
2.大量樣本處理方法
（1）分別吸取15μL不同的樣本依次放入8聯(lián)管中。
（2）加入25 μL RNA Lysis。
（3）充分混勻,室溫靜置5分鐘，10,000rpm離心1分鐘。
（4）分別從（3）中吸取10μL處理后樣品依次加入一新的8聯(lián)管。
（5）每孔分別加入90µL樣品稀釋液混勻。取1-2μL作為熒光PCR反應(yīng)模板。
二、在RNase free 的離心管中配制PCR反應(yīng)體系
PCR反應(yīng)體系 | 20 μL體系（推薦） |
5×one step qRT- PCR Mix | 4 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.4-1μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4-1 μL |
TaqMan Probe | 0.4-1 μL |
Template RNA | 1-2 μL |
ddH2O | 補(bǔ)足至20 μL |
三、反應(yīng)程序
溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
55oC | 15min | 1 |
95oC | 30sec | 1 |
95oC | 10sec |
40-45 |
60oC | 30sec |
（1）在進(jìn)行大量樣品檢測(cè)時(shí)，可將本試劑盒的試劑預(yù)分裝到8聯(lián) PCR管，用多通道移液器進(jìn)行多樣本的處理。
（2）取樣的細(xì)胞量應(yīng)當(dāng)適中，濃度不宜過高或過低，處理后溶液應(yīng)當(dāng)以透明為宜。擴(kuò)增病毒基因時(shí)需要根據(jù)病毒的滴度決定取樣的細(xì)胞數(shù)量。
（3）樣品處理過程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染，推薦設(shè)置陰性樣品參與處理過程，以檢測(cè)環(huán)境的污染。
（4）PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測(cè)Tm值減去5℃，或者通過梯度PCR摸索最佳退火溫度。
（5）用本試劑盒處理的樣品可于-20℃保存 1個(gè)月。
（6）為防止試劑盒污染，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。
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