鼠抗重金屬類單克隆抗體的制備方法介紹

　　鼠抗重金屬類單克隆抗體的制備方法：
 

　　1、制膠及上樣
 

　　(1)配制12%SDS-PAGE分離膠，混勻后注入邊條厚度為2mm的兩塊潔凈玻璃板間，其上加一薄層異丙醇，室溫下靜置至凝固。
 

　　(2)待分離膠*聚合后，傾去其上的水層，以吸水紙吸凈殘余液體，插入加樣梳，緩緩加入濃縮膠，使其充滿加樣梳間的空隙，室溫下靜置。待膠*聚合。
 

　　(3)將凝膠固定于電泳裝置上，上、下槽加入電泳緩沖液。
 

　　(4)小心拔去加樣梳，使加樣孔豎直，以電泳緩沖液沖洗加樣孔數(shù)次。
 

　　(5)分別取50µg蛋白量的細(xì)胞總蛋白樣品及蛋白質(zhì)分子量Marker，按4：1體積比加入5´樣品緩沖液，以1´樣品緩沖液?配平上樣體積后，于沸水浴中煮3min使蛋白變性。
 

　　(6)將處理好的樣品按照預(yù)定的順序加入分離膠的上樣孔中。
 

　　2、電泳
 

　　(1)接通凝膠電泳儀的電源，初始電壓70V。
 

　　(2)溴酚藍(lán)染料的前緣進(jìn)入分離膠上緣后提高電壓至160V，繼續(xù)電泳直至溴酚藍(lán)泳出分離膠的下緣。(約60分鐘)
 

　　3、轉(zhuǎn)膜
 

　　(1)從玻璃板中取出凝膠，將其浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中。
 

　　(2)取與膠同樣大小的硝酸纖維素膜，以95%乙醇浸泡5秒鐘后浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液5分鐘以上待用。
 

　　(3)按順序在轉(zhuǎn)移夾內(nèi)放置預(yù)先經(jīng)轉(zhuǎn)移緩沖液浸泡的海綿、三層濾紙、硝酸纖維素膜、凝膠、三層濾紙、海綿，保證每層之間沒有氣泡。