單抗制備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策

1，融合率低，陽性孔少
①免疫的問題。由于免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱，效價低。
②融合過程中溫度、時間、PEG分子量，作用時間等。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞，有無組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細胞生長狀態是否完好，細胞是否渾圓，透亮，成對數生長。

2，單抗親和力整體低
①免疫的問題。免疫途徑不當或者免疫原問題。
②融合細胞篩選過程出現遺漏，篩選方法不當或檢測方法不當，造成沒有篩到高親和力的融合細胞。
③由于亞克隆細胞生長環境不合適，導致融合細胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時就需要及時更換培養液，當細胞增長到一定密度的時候，培養基就開始變顏色，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失；控制好細胞的密度，密度過大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細胞，當細胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化。
操作細致，防止細胞被支原體等微生物污染。

3，抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養液，當細胞增長到一定密度的時候，培養基就開始變顏色，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細胞的密度，密度過大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變。
③過于頻繁操作細胞，當細胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化。
④細胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數超過5次，導致細胞生長環境經常被改變，弱的陽性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變。