淺析黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟和凈化步驟

    適合于陳皮、胖大海、僵蠶、酸棗仁、桃仁等中藥材品種。*執行2010版中國藥典附錄IXV黃曲霉毒素測定法進行檢測。  

2、黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟：  

    取供試品粉末約15.0g(過二號篩)，精密稱定，加入氯化鈉3.0g，置于均質瓶中，精密加入70%甲醇溶液75.0mL，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11,000轉/分），離心5分鐘(離心速度2500轉/分)，定性濾紙過濾、然后精密量取上清液15.0mL，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，量取續濾液20.0mL，待凈化。  

    混合對照品溶液的制備：精密量取黃曲霉毒素混合標準品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標示濃度分別為1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。  

3、黃曲霉毒素免疫親和柱的凈化步驟：    

    1）回溫解凍：提前半個小時將黃曲霉毒素免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；  

    2）上樣：準確移取20mL提取好的樣品溶液注入免疫親和柱，使溶液以1滴/S的速度通過免疫親和柱，直至2mL-3mL空氣通過柱體，棄去流出液；  

    3）淋洗：用20mL水淋洗免疫親和柱，流速為1滴/s--2滴/s，淋洗兩次。直至空氣進入免疫親和柱，直至2mL-3mL空氣通過柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；  

    4）洗脫：準確加入1.0mL甲醇洗脫，流速約為1滴/s，收集全部的洗脫液于干凈的離心管中，用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2mL，供液相色譜測定。